胰蛋白酶大致可以分為兩種,一種是傳統使用的動(dòng)物源性的胰蛋白酶,主要提取自?;蜇i的胰腺組織,其缺點(diǎn)是可能會(huì )帶來(lái)病毒污染的風(fēng)險;另一種則是非動(dòng)物源性胰酶,即利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。
胰蛋白酶 :早期的胰蛋白酶在生物制藥的主要應用是胰島素的生產(chǎn),不過(guò)很快也在其他領(lǐng)域發(fā)光發(fā)熱。動(dòng)物源的胰蛋白酶具有極大的潛在風(fēng)險,其自身可能攜帶大量可感染人的病毒, 例如:瘋牛病的牛帶有的BSE病毒,豬的口蹄疫病毒,可在人和動(dòng)物之間傳播的禽類(lèi)的流感病毒等。
重組胰蛋白酶 :重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶。在整個(gè)生產(chǎn)流程中,嚴格避免了使用任何動(dòng)物源性原材料,解決了傳統使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來(lái)病毒污染的風(fēng)險,確保了重組胰蛋白酶產(chǎn)品的安全性、高純度及超高比活等特性。是生物藥及科研領(lǐng)域不可缺少的工具酶。
重組熱穩定胰蛋白酶
冀百康生物全新推出的重組熱穩定胰蛋白酶,是通過(guò)畢赤酵母的表達系統,經(jīng)發(fā)酵培養、分離純化,再經(jīng)冷凍干燥得到的重組熱穩定胰蛋白酶粉末。不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制劑,具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。與重組豬胰蛋白酶等不同,該重組熱穩定胰蛋白酶不易自切,配制為細胞消化液后可在2-8℃穩定存放30天,可完美規避在使用重組胰蛋白酶過(guò)程中反復凍融而造成的損耗。TrypRE select(1×)(重組熱穩定胰蛋白酶消化液)更是可在2-8℃條件下可保存24個(gè)月。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
1、不易自切,穩定性較高;
2、避免反復凍融造成的損耗;
3、對細胞作用溫和:細胞毒性小,可保持細胞健康;
4、合規性:生產(chǎn)設備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規要求,符合GMP指導原則。
科普 —— “不易自切”
不易自切是指重組熱穩定胰蛋白酶在催化蛋白質(zhì)水解反應過(guò)程中,相較于傳統胰蛋白酶,不容易發(fā)生自我水解作用,從而避免了自身蛋白分子的快速降解。這種特性使得重組熱穩定胰蛋白酶在保持酶活力和穩定性方面具有顯著(zhù)優(yōu)勢,尤其是在長(cháng)時(shí)間儲存和反復凍融過(guò)程中,能夠最大程度地減少酶活性的損失。
與常見(jiàn)酶液對比
重組熱穩定胰蛋白酶在細胞培養中的應用
在細胞培養過(guò)程中,重組熱穩定胰蛋白酶的高比活性能顯著(zhù)提高細胞消化的效率。使用重組熱穩定胰蛋白酶對貼壁細胞進(jìn)行處理,能夠快速水解細胞間的沾粘蛋白,釋放出單個(gè)獨立細胞。與此同時(shí),重組熱穩定胰蛋白酶不易自切的特性,使得其在細胞消化過(guò)程中能更溫和地作用,降低對細胞造成的傷害,有效避免外源性病毒和內毒素的污染,從而不會(huì )影響細胞傳代,保持了高細胞活力和細胞產(chǎn)量。
*細胞傳代示意圖
(來(lái)源:醫健速知《細胞傳代詳細步驟》)
推薦在實(shí)際應用中的使用步驟:
1)使用前將TrypRE select(1×)和完全生長(cháng)培養基預熱至37℃。隨后,吸出并丟棄用過(guò)的培養基;
2)用5ml不含Ca2+和Mg2+的DPBS緩沖液清洗細胞,隨后吸出并丟棄;
3)加入適量體積TrypRE select(1×)到培養瓶,確保TrypRE select(1×)完全覆蓋細胞;
4)在37℃下孵育,直至細胞脫落。使用倒置顯微鏡觀(guān)察細胞,以確保細胞從培養瓶表面完全脫落;
5)加入5-10ml預熱的完全培養基到培養瓶,傾斜培養瓶直到徹底沖洗培養瓶,將細胞懸液轉移至15ml錐形管中,100×g離心5-10min;
6)丟棄上清液,并用2-5ml預熱的完全培養基重懸細胞沉淀;
7)根據您的細胞類(lèi)型,根據正常方案接種、孵育和繼代培養。
重組熱穩定胰蛋白酶有許多潛在用途,包括用于生物藥物生產(chǎn),如胰島素等。重組熱穩定胰蛋白酶解決了傳統使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來(lái)病毒污染的風(fēng)險是生物藥及科研領(lǐng)域是不可缺少的工具酶。
產(chǎn)品參數
訂購規格
珠海冀百康生物科技有限公司成立于2015年,擁有前沿的合成生物學(xué)創(chuàng )新技術(shù),專(zhuān)注于“高活性生物原料”與“高端生物制藥”兩大核心領(lǐng)域。產(chǎn)品主要應用在抗體、疫苗、蛋白類(lèi)、核酸類(lèi)藥物的生產(chǎn)以及細胞培養、人造肉、功效護膚和醫美領(lǐng)域。冀百康生物擁有4000多㎡符合國際GMP標準的生產(chǎn)車(chē)間, 超2噸的生物發(fā)酵罐;行業(yè)的競爭力主要體現在:研發(fā)創(chuàng )新能力強,客戶(hù)服務(wù)系統完善,給品牌客戶(hù)提供完整的解決方案及CDMO/ODM服務(wù)。
參考文獻:
1、知網(wǎng) [1]楊霽菡.胰蛋白酶自切規律的解析及抗自切改造[D].天津科技大學(xué),2016.DOI:10.27359/d.cnki.gtqgu.2016.000036
2、來(lái)源:冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應用[J]. 中國藥學(xué)(英文版), 2014, 23(5): 335-337.